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Ca2+或FRET比例成像

Ca2+或FRET比例成像

详细说明

VisiFluor Ca ++或FRET比成像显微镜:用于比例实验的集成系统 - 离子浓度或FRET的高精度测量

荧光比例成像涉及向活细胞中引入荧光探针以科研级高速度和高灵敏度相机通过显微镜监测这些细胞。特定荧光探针其在结合特定的离子时改变它的荧光激发或发射光谱,,也满足细胞内离子荧光探针单波长或双波长测量的设计。 VisiFluor支持例如 FURA-2,BCECF,INDO-1和其他常见比例荧光探针。


用于荧光测量使用单波长荧光探针

有关自由离子浓度[I]与荧光F:

[I] = Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)

Fmin和Fmax分别是零和饱和离子浓度下的荧光水平,Kd是离子指示剂复合物的解离。


对于荧光测量使用双波长荧光探针比例式测量细胞内离子

有关自由离子浓度与荧光比有关的计算公式[I] = Kd.S.(R-Rmin)/(Rmax-R)

其中S是在零离子浓度下由R在分母波长处的荧光给出的比例因子除以在饱和离子浓度下的荧光(参见Grynkiewicz,Poenie和Tsien(1985)以推导该方程)。


时间分辨FRET测量

在每个时间点记录供体发射以及受体信号并建立比率(供体发射/ FRET信号)。

FRET value =  [ mean ratio (donor – acceptor) – mean ratio (donor only)] /mean ratio (donor only)

FRET值= [平均比率(供体 - 受体) - 平均比率(仅供体)] /平均比率(仅供体)

供体 - 受体:细胞表达供体和受体分子

仅供体:细胞系仅表达供体分子

 

阈值测量:对每个采集的图像应用一个灰度阈值,以减少背景荧光等低信号的干扰效应,并通过排除阈值区域信号进行比例计算来提高数据收集的准确性。

 

事件标记:事件标记功能可用于存储注射时间,实验条件或应用触发器的变化。

 

记录数据到excel或文本文件:数据文件存储每个测量的时间戳和用户定义的波长平均强度选择